Banca de DEFESA: ANTONIO GREGORIO DIAS JUNIOR

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: ANTONIO GREGORIO DIAS JUNIOR
DATA: 14/06/2013
HORA: 09:00
LOCAL: Auditorio IEC- Ananindeua
TÍTULO: Investigação do perfil de expressão de microRNAs em cultivos de células de carcinoma hepatocelular humano experimentalmente infectados com o Vírus dengue (flaviviridae: flavivirus)
PALAVRAS-CHAVES: Vírus dengue; IL6; TLR8; microRNAs
PÁGINAS: 90
GRANDE ÁREA: Ciências Biológicas
ÁREA: Microbiologia
SUBÁREA: Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
ESPECIALIDADE: Virologia
RESUMO: A espécie Vírus dengue (Flaviviridae, Flavivirus) contém quatro sorotipos (DENV 1- 4) transmitidos por mosquitos do gênero Aedes. O DENV é considerado o causador da arbovirose de maior relevância em termos de saúde pública, principalmente, em países tropicais e subtropicais. Os quadros clínicos podem ser assintomáticos, febre clássica, dengue hemorrágica e síndrome do choque por dengue. Os casos graves estão geralmente relacionados a uma produção exacerbada de citocinas inflamatórias com carga viral elevada, incluindo importante infecção de órgãos, como o fígado. Apesar de relevante, não há vacinas e/ou tratamentos terapêuticos específicos e eficazes. Nesse aspecto, os microRNAs (miRNA) são RNA não codificantes de aproximadamente 22 nucleotídeos com atividades regulatórias na expressão gênica, e vem sendo relacionados como potenciais biomarcadores/alvos terapêuticos em várias enfermidades. Com isso, este estudo visou a pesquisa de miRNA celulares em cultivos de hepatocarcinoma humano experimentalmente infectados com DENV2, de modo a contribuir com o entendimento da imunopatologia da dengue. Para isso, cultivos HepG2 e Huh7.5 foram infectados com uma multiplicidade de infecção 1 com a cepa viral 44/2 e avaliados pela suscetibilidade à infecção viral por imunofluorescência indireta (IFI) e títulos virais nos sobrenadantes em unidades formadoras de placas (PFU) por mL. O cultivo mais suscetível foi adicionalmente infectado e analisado até 96 horas pós-infecção (hpi) para pesquisa da curva de título viral (log2 de PFU/mL), viabilidade celular e produção de caspase 3 por imunocitoquímica. Após isso, foram realizados perfis de miRNA até 48 hpi por microarray e validados pelo ensaio da transcrição reversa seguida da reação em cadeia mediada pela polimerase em tempo real (RT-qPCR). Com a confirmada expressão de miRNA, foi verificada a expressão do receptor semelhante a Toll 8 (TLR8) e a citocina IL6. Em suma, o cultivo Huh7.5 foi o mais suscetível à infecção pela cepa viral 44/2, e apresentou picos de títulos virais em 48 e 72 hpi. A viabilidade celular foi decrescente com diminuição de aproximadamente 30% após 48 hpi. De modo semelhante, os níveis de caspase 3 foram identificados. O perfil de miRNA apresentou quatro principais miRNA com níveis de expressão alterados de forma relevante, porém, somente dois desses foram validados por RT-qPCR devido as suas relevâncias hipotéticas sugeridas sobre a regulação e mecanismos da imunopatologia devidos a infecção/replicação do DENV. Esses miRNA mostraram níveis de expressão aumentada em relação aos controles não infectados, assim como, foram também elevadas as produções de IL6 e TLR8. Em conclusão, verificou-se que os cultivos Huh7.5 ao serem infectados com o DENV2 foram destinados a morte celular em poucos dias pós infecção. Esse fenótipo foi observado com o aumento da expressão dos dois principais miRNA em paralelo a TLR8 e a citocina IL6.
MEMBROS DA BANCA:
Interno - 1258568 - ANTONIO CARLOS ROSARIO VALLINOTO
Interno - 1372427 - EVONNILDO COSTA GONCALVES
Interno - 558.405.232-91 - MARCIO ROBERTO TEIXEIRA NUNES - IEC
Presidente - 103.558.552-91 - PEDRO FERNANDO DA COSTA VASCONCELOS - UFPA