Banca de DEFESA: DAISY ELAINE ANDRADE DA SILVA

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: DAISY ELAINE ANDRADE DA SILVA
DATA: 13/05/2013
HORA: 09:00
LOCAL: Auditório do Instituto Evandro- IEC Ananindeua
TÍTULO: CONSTRUÇÃO DO MINIGENOMA DO VÍRUS OROPOUCHE (BUNYAVIRIDAE, ORTHOBUNYAVIRUS)
PALAVRAS-CHAVES: ESTRUTURAIS
PÁGINAS: 37
GRANDE ÁREA: Ciências Biológicas
ÁREA: Microbiologia
SUBÁREA: Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
ESPECIALIDADE: Virologia
RESUMO: O desenvolvimento de sistemas de genética reversa para vírus de RNA de filamento negativo é um campo de pesquisa em constante crescimento que avançou nos estudos de vários aspectos do ciclo de vida dos vírus. O vírus Oropouche (VORO), família Bunyaviridae, é um agente infeccioso emergente que tem causado numerosas epidemias de “febre do Oropouche” no Brasil, Peru e Panamá. A “febre do Oropouche” constitui uma das arboviroses de maior importância em saúde pública na região Amazônica. No presente estudo, descrevemos o primeiro sistema de minigenoma para esse bunyavírus, como também os obstáculos que ainda existem para o desenvolvimento de tal sistema. Nós construímos cinco plasmídeos suportes que expressavam os genes das proteínas L, N, NSs e M do VORO inseridos no plasmídeo de expressão pTM1, além dos plasmídeos suportes que expressavam as proteínas L e N doados pelo Dr. Manfred, Universidade de Gottigen, Alemanha. O minigenoma do VORO consistia nas regiões dos terminais 3’ e 5’ do gene do segmento M flanqueado pelo gene repórter codificante da proteína Renilla Luciferase e foi construído para analisar a eficácia dos quatro plasmídeos suportes, pTM1-OROV-L, pTM1-OROV-N, pTM1-OROV-S, pTM1-OROV-M, na replicação e transcrição do genoma viral. Após co-transfecção das células BSR-T7/5 com os plasmídeos suportes e o plasmídeo do minigenoma, a replicação do RNA do minireplicon foi realizada pela determinação da atividade da luciferase. No sistema de minigenoma, a expressão do gene repórter foi detectada. Para elucidar a função da proteína não estrutural NSs do VORO, nós construímos o plasmídeo pTM1-OROV-NSs. A co-expressão da proteína NSs levou a diminuição da atividade da proteína repórter sem afetar a expressão do sistema controle. A proteína NSs de outro membro da família Bunyaviridae, vírus Bunyamwera (VBUN), também inibiu a atividade da Renilla no nosso sistema de minireplicon do VORO, ou seja, a proteína não estrutural NSs dos bunyavírus controla a atividade da polimerase viral por um mecanismo altamente conservado. Os resultados indicam que os plasmídeos suportes foram expressos e formam um complexo funcional de ribonucleoproteínas que direciona efetivamente a transcrição do RNA do minigenoma do VORO.
MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - DANIELE BARBOSA DE ALMEIDA MEDEIROS - IEC
Interno - 2178281 - JEANNIE NASCIMENTO DOS SANTOS
Presidente - 558.405.232-91 - MARCIO ROBERTO TEIXEIRA NUNES - IEC
Interno - 103.558.552-91 - PEDRO FERNANDO DA COSTA VASCONCELOS - UFPA
Externo à Instituição - SUELI GUERREIRO RODRIGUES - IEC