Banca de QUALIFICAÇÃO: INGRID DOS SANTOS LAMARÃO

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: INGRID DOS SANTOS LAMARÃO
DATA: 03/11/2021
HORA: 09:00
LOCAL: Plataforma Google Meet
TÍTULO:

DESENVOLVIMENTO DE UMA PCR TEMPO REAL PARA A DETECÇÃO DE ESPÉCIES DE Mycoplasma spp. DE IMPORTÂNCIA VETERINÁRIA

PALAVRAS-CHAVES:

Mycoplasma, RT-qPCR, diagnóstico molecular.

PÁGINAS: 16
GRANDE ÁREA: Ciências Biológicas
ÁREA: Microbiologia
RESUMO:

Os hemoplasmas são bactérias sem parede celular, não cultiváveis em laboratório, que parasitam a superfície de eritrócitos e causam anemia hemolítica em várias espécies de mamíferos, além de letargia, anorexia e perda de peso que podem levar a morte.  Esses patógenos possuem distribuição cosmopolita e fazem parte do gênero Mycoplasma com base na análise da sequência do gene 16SrRNA. Tradicionalmente, o diagnóstico é realizado através da confecção dos esfregaços sanguíneos, onde podem ser visualizados como, anéis ou hastes, ou também na forma de cadeia dependendo do nível de infecção, porém esta técnica apresenta pouca sensibilidade e especificidade. O presente estudo tem como objetivo desenvolver um protocolo de PCR em tempo real para a detecção mais rápida e precisa de cinco espécies do gênero Mycoplasma, a fim de ser utilizado na rotina do diagnóstico da infecção na área de Medicina Veterinária. As amostras utilizadas para a padronização deste protocolo serão cedidas pelo Laboratório Pargen e as amostras conhecidamente positivas dos hemoparasitas Babesia canis vogeli, Ehrlichia canis e Anaplasma platys serão utilizadas para avaliar a especifidade do novo protocolo. A extração de DNA será realizada a partir de amostras de sangue utilizando o Biopur Kit Mini Spin Plus (Biometrix, Curitiba, Brasil). A pesquisa de Mycoplasma spp. (M. haemocanis, M. haemofelis, Candidatus M. haemominutum, Candidatus M. turicensis e Candidatus M. haematoparvum) por PCR em tempo real será baseada no gene 16SRNA. Os iniciadores serão desenhados utilizando os software online PrimerQuest Tool (https://www.idtdna.com/Primerquest/Home/Index) de acordo com as sequencias de DNA publicadas no GenBank (HQ918288.1, KM275247.1, KM275257.1, KM275268.1 e KP715860.1) e devem amplificar um fragmento de 77 pb.  A padronização da PCR em tempo real será realizada no equipamento AriaMx (Agilent, Santa Clara, EUA). O master mix utilizado será o Brilliant III SYBR® Green QPCR Master Mix (Agilent). Os primers serão sintetizados pela Exxtend (Exxtend, Campinas, Brasil). O perfil de temperatura reação será de acordo com o recomendado pelo fabricante do Master Mix.  O volume final da reação será de 20 μL sendo 10ul de master mix, 1ul de primers (200nM), 4 ul de água livre de nucleases e 5ul de DNA. 

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - DANILO LEONCIO AGUIAR PEREIRA
Presidente - 2206136 - LUIZ FERNANDO ALMEIDA MACHADO
Interno - 2776913 - MIONI THIELI FIGUEIREDO MAGALHAES DE BRITO
Externo ao Programa - 2492740 - ROSIMAR NERIS MARTINS FEITOSA