Banca de DEFESA: JANAINA DE LIMA LEÃO

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: JANAINA DE LIMA LEÃO
DATA: 09/08/2016
HORA: 09:00
LOCAL: Auditório Central do Instituto Evandro Chagas- Ananindeua-PA
TÍTULO:

Diagnóstico de malária humana usando PCR em tempo real duplex para detecção precisa de Plasmodium sp. diante de cenários de eliminação

PALAVRAS-CHAVES:

Plasmodium sp., PCR em tempo real duplex, Eliminação.

PÁGINAS: 15
GRANDE ÁREA: Ciências Biológicas
ÁREA: Biologia Geral
RESUMO:

Introdução: Novas abordagens moleculares, como a PCR em tempo real tem sido desenvolvidas com a finalidade de garantir a detecção acurada de espécies de Plasmodium sp. Essa técnica possui baixo risco de contaminação cruzada e ambiental, rápida execução e limite de detecção de 1-5 parasitos/μL de sangue, sendo factível para rastreamento de assintomáticos, detecção de infecções mistas e baixas parasitemias. O diagnóstico preciso de malária é fundamental para assegurar o tratamento eficaz desse agravo, além de melhorar a prestação de serviços em saúde e gerar dados para direcionar as ações de controle regionais e nacionais, sobretudo diante dos progressos dessas estratégias em direção a eliminação. Objetivo: Validar protocolo de PCR em Tempo Real duplex para detecção espécie-específica das quatro espécies do gênero Plasmodium em amostras clínicas. Metodologia: Foram incluídos pacientes com febre (temperatura axilar> = 37,5ºC) ou história de febre nas últimas 24h, que se apresentaram nos municípios de Belém, Goianésia do Pará e Itaituba, estado do Pará, para realizar o diagnóstico da malária nos anos de 2014 a 2015. O DNA foi extraído de amostras impregnadas em papel de filtro, usando kits comerciais e processamento do material em um laboratório de referência. Além da microscopia pelas técnicas de Gota Espessa/Distensão Sanguínea para identificação da espécie de plasmódio e determinação da parasitemia, preparadas e examinadas por dois microscopistas independentes, foram realizados ensaios de Nested-PCR e PCR em tempo real duplex. Todos os procedimentos laboratoriais foram executados em duplicatas e para a Nested-PCR e PCR em tempo real, foram utilizados controles positivos para cada uma das quatro espécies de Plasmodium e controle negativo. A Nested-PCR foi usada como teste de referência. Resultados: Do total de 312 amostras avaliadas, a Gota Espessa detectou 136 amostras positivas, sendo seis infecções mistas (P.falciparum/P.vivax) e 176 negativas. Já a PCR em tempo real identificou 138 e 174 isolados positivos e negativos, respectivamente, detectando 14 infecções mistas. A sensibilidade e a especificidade da PCR em tempo real foram 98.57% e 100,00%, respectivamente. A microscopia mostrou sensibilidade de 97.14% e especificidade de 100,00%. A correlação entre PCR em tempo real e Nested-PCR apresentou excelente concordância na detecção de amostras positivas e negativas (0,96 e 0,98, kappa IC:95%). No caso de infecções mistas, a PCR em tempo real identificou maior número que a Nested-PCR, obtendo concordância boa para identificação deste perfil de resposta entre as duas técnicas (0,87 kappa IC:95%). Conclusão: O protocolo de PCR em tempo real duplex avaliado apresentou sensibilidade, especificidade e reprodutibilidade excelentes para detecção de infecções por Plasmodium sp.

MEMBROS DA BANCA:
Interno - 1025756 - ANDREA LUCIANA SOARES DA SILVA
Presidente - 559.596.442-15 - GISELLE MARIA RACHID VIANA - IEC
Externo ao Programa - 1774491 - LEONARDO DOS SANTOS SENA
Externo ao Programa - 118.790.092-34 - MARINETE MARINS PÓVOA - IEC
Externo ao Programa - 330.495.642-53 - SILVIA HELENA MARQUES DA SILVA - IEC