Banca de QUALIFICAÇÃO: ANDREA SILVESTRE LOBÃO COSTA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: ANDREA SILVESTRE LOBÃO COSTA
DATA: 02/06/2015
HORA: 15:00
LOCAL: Sala de espera do LAC- UFPA
TÍTULO:

Padronização de um protocolo de PCR em tempo real para o diagnóstico dos genótipos da proteína circunsporozoíta de Plasmodium vivax (VK210, VK247 e P. vivax-like)

PALAVRAS-CHAVES:

Plasmodium vivax, proteína circunsporozoíta, PCR em tempo real, genótipos CSP, epidemiologia.

PÁGINAS: 20
GRANDE ÁREA: Ciências da Saúde
ÁREA: Medicina
RESUMO:

A proteína circunsporozoíta (CSP) do Plasmodium vivax, espécie de plasmódio mais distribuído no mundo, tem sido extensivamente estudada quanto ao desenvolvimento de uma vacina que bloqueie a infecção. Contudo, a descoberta de regiões repetitivas na porção central do gene CSP, gerando três diferentes genótipos (VK210, VK247 e P.vivax-like), prejudicou o desenvolvimento de uma vacina eficaz, uma vez que a porção repetitiva é a mais significativamente imunogênica, tornando-se necessário uma melhor compreensão acerca da real implicação dessa variação genética no genoma do P. vivax. O protocolo molecular é a ferramenta mais eficaz para diferenciar os genótipos das variantes da CSP de P. vivax. Dessa forma, o objetivo deste trabalho é desenvolver um ensaio molecular em tempo real com sondas TaqMan utilizando o protocolo do Cassiano e colaboradores (2011) como padrão de referência, aperfeiçoando o protocolo existente, acrescentando à ele as vantagens inerentes à metodologia em tempo real, como aumento na sensibilidade do teste, redução do tempo de liberação dos resultados e diminuição dos riscos de contaminação devido à eliminação da etapa pós-PCR. Para a padronização deste protocolo molecular em tempo real serão utilizados três diferentes plasmídeos; um para cada região repetitiva da CSP de cada genótipo como controle positivo. Serão utilizados isolados de P. vivax representantes da Amazônia oriental e ocidental brasileira. Um conjunto de 242 amostras utilizadas por Cavasini e colaboradores (2007) será utilizado. Serão utilizados também 45 isolados provenientes de Ji-Paraná/Rondônia (Oliveira-Ferreira et al., 2004) e 55 isolados de Goianésia do Pará/Pará existentes no Laboratório de Pesquisas Básicas em Malária do Instituto Evandro Chagas. O RNA das amostras criopreservadas será extraído utilizando kit comercial QiAmp viral mini kit. A PCR quantitativa em tempo real será padronizada com os mesmos oligonucleotídeos iniciadores utilizados por Cassiano e colaboradores, 2011. Para a construção da curva padrão de amplificação será necessário utilizar plasmídeos clonados com seguimentos específicos dos genótipos da CS do P. vivax, a fim de realizar posterior diluição seriada para determinar o número de cópias do transcrito. A padronização dessa metodologia será importante no desenvolvimento de estudos que auxiliem na elucidação do padrão geográfico e a avaliação da expressão gênica dos genótipos detectados.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - ANA MARIA REVOREDO VENTURA
Externo ao Programa - 1774934 - FRANCISCO ACACIO ALVES
Interno - 2153543 - MARISTELA GOMES DA CUNHA
Presidente - 728.858.587-53 - RICARDO LUIZ DANTAS MACHADO - IEC