“ATIVIDADE E EXPRESSÃO DA METALOPROTEASE GP63 NAS ESPÉCIES LEISHMANIA (LEISHMANIA) AMAZONENSIS E LEISHMANIA (VIANNIA) BRAZILIENSIS”
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A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença tropical negligenciada de caráter infeccioso causada por protozoários do gênero Leishmania sp. No Brasil, Leishmania (L.) amazonensis e Leishmania (V.) braziliensis são as principais espécies patogênicas. As diferentes cepas e espécies, bem como a resposta imunológica do hospedeiro vertebrado, são pontos-chave no desenvolvimento da doença e, consequentemente, nas diferentes manifestações clínicas causadas por esses protozoários como a leishmaniose cutânea localizada (LCL), leishmaniose cutânea difusa (LCD) e leishmaniose mucocutânea (LMC). Parasitos do gênero Leishmania possuem aprimorados mecanismos com a capacidade de silenciar a resposta microbicida de macrófagos infectados através da ação de fatores de virulência como a glicoproteína 63 (GP63). Esta glicoproteína, que possui um sítio catalítico zinco-dependente, é a principal metaloprotease de superfície da Leishmania e é capaz de modular a resposta imune do hospedeiro vertebrado ao clivar um conjunto amplo de substratos citosólicos. Contudo, devido à necessidade de compreensão da atuação e envolvimento da GP63 nos processos de infecção e diferentes manifestações clínicas, é importante analisar que de que forma esta molécula está presente durante esses processos. Tendo isso em vista, a hipótese deste estudo é se existe diferença na expressão do fator de virulência gp63 entre duas espécies causadoras de LTA, Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) braziliensis que causam diferentes manifestações clínicas. Portanto, o objetivo deste trabalho foi analisar a expressão e atividade da gp63 nas espécies Leishmania (L.) amazonensis e Leishmania (V.) braziliensis, que possuem maior relevância para o acometimento da LTA. A atividade da gp63 foi analisada utilizando formas promastigotas na fase estacionária (4 e 7 dias de cultivo). Os parasitos foram submetidos à análise do perfil proteolítico através da DQ-gelatin (10µg/ml) em fluorímetro (VICTOR Multilabel Plate Reader X) com comprimento de onda de 480-520 nm. A atividade também será analisada por zimografia em gel contendo 0,1% de gelatina como substrato. A expressão da gp63 será analisada por Western blot utilizando anticorpo anti-GP63. A imunomarcação e quantificação da proteína GP63 serão analisadas por imunofluorescência indireta. Este trabalho mostrou pela primeira vez que a espécie Leishmania (L.) amazonensis apresenta maior atividade da glicoproteína 63 kDa em comparação com a espécie Leishmania (V.) braziliensis