Banca de DEFESA: JESSICA SABRINA CORDEIRO PARENTE

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: JESSICA SABRINA CORDEIRO PARENTE
DATA: 10/04/2019
HORA: 14:00
LOCAL: Instituto de Ciências Biológicas/UFPA
TÍTULO:

DESENVOLVIMENTO DE UMA PCR MULTIPLEX PARA A DETECÇÃO DA INFECÇÃO GENITAL PELO PAPILOMAVÍRUS HUMANO (HPV),  HERPESVÍRUS HUMANO (HHV) TIPO 1 E TIPO  2.

PALAVRAS-CHAVES:

infecção genital, HPV, herpes

PÁGINAS: 64
GRANDE ÁREA: Ciências Biológicas
ÁREA: Microbiologia
RESUMO:

Introdução: O Papillomavírus humano (HPV), e os Herpesvírus humano 1 e 2 (HHV-1 / HHV-2) apresentam semelhanças entre si, como a capacidade de permanecer latente e causar infecções recorrentes. Os testes comumente realizados para o diagnóstico destes patógenos e considerados como padrão ouro, não apresentam uma alta sensibilidade para todos os tipos de infecções. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi padronizar a metodologia de PCR multiplex para a detecção da infecção genital pelo HPV, HHV- 1 e 2. Material e Métodos: Para a realização dos testes de PCR utilizamos os iniciadores MY09/MY011 para amplificação da região ORF-L1 do HPV, H1P32/H1M32 para a região RL-2 do HHV-1, e H2M40/H2P4 para a região UL-28 do HHV-2. Empregamos DNA extraído de cultivo celular como controle positivo para HHV-1 e 2, e para o HPV utilizamos DNA extraído de amostras cérvico-uterinas provenientes de um biobanco. Primeiramente, realizamos uma PCR singleplex para cada vírus, para posterior padronização da PCR multiplex, onde utilizamos três protocolos com volumes finais de 25 μL, 50 μL e 100 μL diferentes a fim de observar o melhor padrão de amplificação simultânea. Resultados: Após analisar o resultado da amplificação dos três protocolos, escolhemos o protocolo com volume final de 25 μL, e realizamos diversos testes para otimização das condições de reação e de ciclagem. Dentre estes testes, observamos a amplificação simultânea dos três vírus ao ajustar a concentração de dNTPs, cloreto de magnésio, Taq DNA polimerase, e dos iniciadores. Além disso, a concentração de DNA dos controles foi ajustada ao longo dos testes realizados, onde observamos um limiar de detecção mínimo para HHV-1 de 8.4 ng, para HHV-2 de 28.4 ng, e para o HPV de 136.8 ng. Conclusão: Nossa técnica é capaz de detectar e distinguir cada vírus em baixas quantidades de DNA. Nossos resultados corroboram acordo com diversos estudos na literatura que estabelecem um protocolo com soluções práticas para a otimização da PCR multiplex, e resolução dos problemas comumente encontrados. A aplicação desta protocolo em uma amostragem cérvico-uterinas recém coletadas, é essencial para a validação do método.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 2866164 - JACQUELINE CORTINHAS MONTEIRO
Interno - 820.341.252-15 - RENATA BEZERRA HERMES - UFPA
Externo ao Programa - 2343103 - LUCIMAR DI PAULA DOS SANTOS MADEIRA
Externo à Instituição - NUBIA CAROLINE COSTA DE ALMEIDA
Externo à Instituição - SAMARA TATIELLE MONTEIRO GOMES