Banca de QUALIFICAÇÃO: AMANDA ANASTACIA PINTO HAGE

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: AMANDA ANASTACIA PINTO HAGE
DATA: 08/02/2013
HORA: 14:30
LOCAL: SALA LM-03/INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS/UFPA
TÍTULO: CARACTERIZAÇÃO LIPÍDICA DE DUAS CEPAS DE Leishmania (Viannia) braziliensis CAUSADORAS DA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA
PALAVRAS-CHAVES: Leishmania (Viannia) braziliensis, cepas, corpúsculos lipídicos, infectividade.
PÁGINAS: 37
GRANDE ÁREA: Ciências Biológicas
ÁREA: Parasitologia
RESUMO: A Leishmaniose tegumentar americana (LTA) constitui uma doença infecciosa causada por protozoários do gênero Leishmania com elevada incidência na região Amazônica. Uma variedade de espécies de Leishmania é responsável por esta patologia. Desta forma, dependendo da espécie e da resposta imunológica do hospedeiro vertebrado, a doença pode se apresentar com diferentes formas clínicas, incluindo a leishmaniose cutânea localizada (LCL) e leishmaniose mucocutânea (LMC). A principal espécie responsável pela LTA é a Leishmania (Viannia) braziliensis. Contudo, devido à existência de uma multiplicidade de cepas desta espécie, torna-se importante o conhecimento dos aspectos metabólicos básicos do protozoário, como o metabolismo lipídico, na tentativa de caracterizar vias ou componentes fundamentais para seu desenvolvimento e infectividade. Este trabalho tem como objetivo analisar o perfil lipídico e a distribuição de corpúsculos lipídico (CLs) em duas cepas de L. (V.) braziliensis, isolada de diferentes casos clínicos, em diferentes fases do crescimento celular. As formas promastigotas das cepas M17593 (LCL) e M17323 (LMC) de L. (V.) braziliensis foram mantidas em meio RPMI 1640 à 27ºC e utilizadas na fase estacionária inicial (EST-I) e estacionária tardia (EST-T) do crescimento. Para análise da composição lipídica, os parasitos foram submetidos à extração lipídica, seguido de gravimetria e HPTLC para fosfolipídios e lipídios neutros. Para identificação e quantificação de CLs foram feitas análises por microscopia eletrônica de transmissão (MET) e citometria de fluxo, Na análise citoquímica por MET, as células foram fixadas em uma solução contendo 2,5% de glutaraldeído tipo II (70%), 4% de paraformaldeído e 2,5% de sacarose, em tampão cacodilato de sódio 0.1 M, pH 7,2. Após lavagem em tampão cacodilato e tampão imidazol 0.1 M, pH 7,5, as amostras foram pós-fixadas em solução contendo tetróxido de ósmio 2% e tampão imidazol 0.1 M por 30 minutos, desidratadas em acetona, infiltradas e incluídas em resina Epon. Os cortes ultrafinos obtidos foram analisados por MET, LEO 906 E. Para análise por citometria de fluxo, os parasitos da cepa LMC foram incubados com Bodipy® 493/503 (10 µg/mL em PBS) por 20 minutos, protegido da luz. Após lavagem, foi realizada leitura em citômetro de fluxo BD FACSCanto II, seguida de análise com o programa WinMDI 2.8. A viabilidade dos parasitos para essa técnica foi confirmada com uso do iodeto de propídio (100 mg/mL) por 5 minutos. A técnica de HPTLC mostrou que a cepa LCL apresentou maior concentração de lipídios quando comparado com a cepa LMC, em ambas as fases do crescimento, principalmente colesterol esterificado, ácidos graxos livres, triglicerídeos e um tipo de composto não definido. Colesterol, diacilglicerol e ergosterol também foram detectados em menor quantidade, porém predominante na cepa LCL. A análise citoquímica para detecção de lipídios neutros por MET mostrou que a cepa LCL apresenta 4,34 CLs/parasito, e a cepa LMC 3,6, durante a fase EST-I. Além disso, a análise por citometria de fluxo na cepa LMC, indicou que há maior detecção de CLs durante a fase EST-I do crescimento. Estes resultados preliminares indicam que há uma variação no perfil lipídico e na distribuição de CLs entre as diferentes cepas de L. (V.) braziliensis, que pode estar relacionado com a infectividade do parasito e, consequentemente, com a manifestação clinica da doença.
MEMBROS DA BANCA:
Externo ao Programa - 2434806 - CHUBERT BERNARDO CASTRO DE SENA
Presidente - 2189846 - EDILENE OLIVEIRA DA SILVA
Externo ao Programa - 1747255 - MOYSES DOS SANTOS MIRANDA