METABOLISMO LIPÍDICO DE OÓCITOS E EMBRIÕES BUBALINOS PRODUZIDOS IN VITRO
Produção in vitro de embrião, carnitina, bubalus bubalis
Os resultados da produção in vitro de embriões na espécie bubalina ainda se encontram aquém dos observados em outras espécies domesticas. A dificuldade em fornecer o microambiente adequado durante os processos de maturação, fecundação e desenvolvimento embrionário inicial, devido principalmente ao desconhecimento das necessidades metabólicas especificas para esta espécie, apresenta-se como um dos principais entraves para a implementação desta biotecnologia em escala comercial. Tem-se planteado a hipótese que os lipídios representam uma importante fonte endógena de energia indispensável para os processos de maturação oocitária e desenvolvimento embrionário inicial, assim, alterações no processo de β-oxidação lipídica afetam os processos de maturação oocitária e desenvolvimento embrionário em condições de cultivo in vitro. Para testar esta hipótese, no presente estudo objetivou-se avaliar o metabolismo lipídico de oócitos e embriões bubalinos maturados e cultivados in vitro. Para a realização dos diferentes experimentos, grupos de 10 CCOs bubalinos foram maturados, fecundados e cultivados em condições de laboratório. Na primeira parte do experimento, foi testado o efeito da suplementação com L-carnitina (3,03 mM) durante a maturação de CCOs em presencia ou ausência de soro fetal bovino (SFB). Posteriormente, o processo de β-oxidação foi estimulado durante a etapa da maturação e/ou durante o cultivo embrionário, mediante a suplementação dos meios de cultivo com L-carnitina (3,03 mM). Nas duas etapas foram avaliados os efeitos sobre as taxas de clivagem e produção de blastocistos. Finalmente, foi avaliado o efeito da suplementação com L-carnitina na presença ou ausência de SFB durante o período de maturação, sobre a expressão dos genes ACACA, FABP3, SCD, CPT1, e FASN, em células do cúmulus e oócitos, antes e depois do processo de maturação, e juntamente, buscando realizar analises comparativos, foi avaliada a expressão dos mesmos genes em oócitos e células do cúmulus maturados in vivo. Os dados Foram analisados mediante ANOVA, e as diferenças foram avaliadas pelo teste Tukey. O nível de significância para as diferentes avaliações foi de 5%. Os resultados preliminares mostram que CCOs maturados em meio de cultivo com SFB na presença de L-carnitina produziram uma menor taxa de embriões (p≤0,05) em comparação aos grupos controles. Por sua vez, a taxa de produção de blastocistos a partir de CCOs maturados com BSA-FAF na presença de L-carnitina foi similar em relação aos grupos controles (p≥0,05), e foi maior em comparação ao grupo suplementado com L-carnitina na presença de SFB (p≤0,05) (36,3±11,2; 34,7±9,5; 32,5±8,6 e 17,2±8,6; para os grupos BSA-FAF+L-carnitina, BSA-FAF controle, SFB controle, SFB+L-carnitina, respectivamente). A adição de L-carnitina durante o cultivo dos embriões não mostrou diferenças na produção de blastocistos entre os diferentes grupos avaliados (p≥0,05). Em conclusão, na presença de SFB, a suplementação do meio de maturação de CCOs bubalinos com L-carnitina na concentração de 3,03 mM diminui a taxa de produção de blastocistos, sugerindo que o aumento da β-oxidação dos ácidos graxos, na presença de uma fonte rica em estruturas lipídicas (SFB), afeta negativamente o metabolismo dos CCOs, diminuindo a competência dos oócitos bubalinos.