METABOLISMO LIPÍDICO DE OÓCITOS E EMBRIÕES BUBALINOS PRODUZIDOS IN VITRO
Produção in vitro de embrião, carnitina, bubalus bubalis
Os resultados da produção in vitro de embriões na espécie bubalina ainda se encontram aquém dos observados em outras espécies domesticas. A dificuldade em fornecer o microambiente adequado durante os processos de maturação, fecundação e desenvolvimento embrionário inicial, devido principalmente ao desconhecimento das necessidades metabólicas especificas para esta espécie, apresenta-se como um dos principais entraves para a implementação desta biotecnologia em escala comercial. Tem-se planteado a hipótese que os lipídios representam uma importante fonte endógena de energia indispensável para os processos de maturação oocitária e desenvolvimento embrionário inicial, assim, alterações no processo de β-oxidação lipídica afetam os processos de maturação oocitária e desenvolvimento embrionário em condições de cultivo in vitro. Para testar esta hipótese, no presente estudo objetiva-se avaliar o metabolismo lipídico de oócitos e embriões bubalinos maturados e cultivados in vitro. Para a realização dos diferentes experimentos, grupos de 10 CCOs bubalinos serão maturados, fertilizados e cultivados em condições de laboratório. Na primeira parte do experimento, será testado o efeito da suplementação com L-carnitina (3,03 mM) durante a maturação de CCOs em presencia ou ausência de soro fetal bovino (SFB). Posteriormente, o processo de β-oxidação será estimulado durante a etapa da maturação e/ou o cultivo embrionário mediante a suplementação do meio de cultivo com L-carnitina (3,03 mM). Nas duas etapas serão avaliados os efeitos sobre as taxas de clivagem e produção de blastocistos. Finalmente, será avaliado o efeito da suplementação com L-carnitina na presença ou asuencia de SFB durante o período de maturação, sobre a expressão dos genes ACACA, FABP3, SCD, HSL, CPT1, FASN, em células do cúmulus e oócitos, antes e depois do processo de maturação. Os dados serão avaliados mediante analise de variância, e as diferenças serão avaliadas pelo teste Tukey. As correlações entre resultados serão avaliadas mediante correlação de Pearson. O nível de significância para as diferentes avaliações será de 5%.