Banca de DEFESA: HENRY DANIEL MANRIQUE AYALA

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: HENRY DANIEL MANRIQUE AYALA
DATA: 31/08/2016
HORA: 14:30
LOCAL: Auditório do Instituto da Saúde e Produção Animal da UFRA
TÍTULO:

Estudo anatomopatológico, imunohistoquímico e molecular da infecção natural por Brucella Abortus em búfalas (Bubalus bubalis)

PALAVRAS-CHAVES:

Bubalino, Imunohistoquímica, PCR, Amazônia

PÁGINAS: 70
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Medicina Veterinária
SUBÁREA: Patologia Animal
ESPECIALIDADE: Anatomia Patologia Animal
RESUMO:

A brucelose é uma doença antiga com mecanismos evolucionados que permitem manipular a imunidade celular e resistir a respostas celulares imunes, conseguindo assim persistência intracelular. Constituí uma importante doença zoonótica responsável por consideráveis perdas econômicas em animais de produção. O objetivo deste estudo é descrever as alterações histológicas uterinas de vacas bubalinas naturalmente infectadas com Brucella abortus e comparar estas alterações com os resultados imunohistoquímicos e detectar o agente pela reação em cadeia mediada pela polimerase (PCR). Foram colhidas amostras de 19 bufalas reagentes ao antígeno acidificado tamponado (AAT) e fixação de complemento (FC). Para o controle negativo foi selecionado um animal não reagente a (FC). Para os controles positivos foram representados por linfonodos de dois casos, com (PCR) positivos à B. abortus. A colheita foi realizada na linha de abate num frigorifico do município de Castanhal-PA, registrado e fiscalizado pelo Serviço de Inspeção Estadual (SIE) da Agência de Defesa Agropecuária de Estado do Pará (ADEPARÁ), os úteros foram acondicionados em caixa de polímero expandido contendo gelo e encaminhadas ao Laboratório de Patologia Animal (LABOPAT) do Instituto da Saúde e Produção Animal da Universidade Federal Rural da Amazônia (ISPA-UFRA). As amostras foram avaliadas macroscopicamente para a histopatologia e imunohistoquimica amostras de linfonodo perivaginal e útero foram fixadas em formol tamponado a 10%, por um período superior a 48 horas e processadas rotineiramente para a coloração pela hematoxilina - eosina. A análise imunohistoquímica foi feita no Instituto Evandro Chagas onde  os cortes em lâminas positivadas foram incubadas com um anti-soro monoclonal de coelho contra o B. abortus na diluição de 1:200, incubadas pelo complexo streptavidina-biotina (LSAB) com o anticorpo secundário biotinilado universal; para a revelação das reações foi utilizado o cromógeno diaminobenzidina (DAB). As Reações em Cadeia da Polimerase (PCR) foram realizadas no Laboratório de Tecnologia Biologia Molecular da Universidade Federal do Pará (LTB-UFPA), foi realizada a extração de DNA pelo método Proteinase K e Guanidina, modificado, de acordo com o protocolo de (BIASE et al., 2002). Utilizando as sequências do primer Forward (GAGAATAAAGCCAACACCCG) e Reserve (GATGGACGAAACCCACGAAT) para amplificar uma sequência de 317 pb (pares de bases) que inclui a região IS711 do genoma da Brucella. Nos resultados de IHQ foram achadas imunomarcação no linfonodo perivaginal e útero de 75% (15) e 25% (5) respetivamente assim com os que não imunomarcaram 25% (5) e 75% (15) (P=0,0017). Na detecção do agente por PCR segundo o local linfonodo perivaginal, muco uterino e útero foram achados valores de 47,0% (8)^b, 82,3% (14)^a, 29,4% (5)^b (P<0,002). Os dados foram processados em planilhas eletrônicas e submetidos ao programa estatístico SAS (2009), onde as frequências foram submetidas ao teste estatístico de Fisher.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 220.629.201-72 - WASHINGTON LUIZ ASSUNÇÃO PEREIRA - UFRA
Externo ao Programa - 1295787 - PEDRO SOARES BEZERRA JUNIOR
Externo à Instituição - ALEXANDRE DO ROSARIO CASSEB
Externo à Instituição - SANDRO PATROCA DA SILVA
Externo à Instituição - SEBASTIAO TAVARES ROLIM FILHO