USO DO FLUIDO FOLICULAR E DE FRAGMENTOS DO EPITELIO DO OVIDUTO NA PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS
Fluido Folicular; Oviduto; Fecundação in vitro; Cultivo in vitro; Produção in vitro de embriões.
RESUMO
A produção in vitro de embriões (PIVE) é uma importante ferramenta no aumento da produtividade dentro da pecuária, especialmente para bovinos. Apesar do relevante progresso alcançado nos últimos anos e de ser bastante difundida e utilizada comercialmente em diversas espécies de animais de produção, as taxas de formação dos embriões e a qualidade dos embriões obtidos através da PIVE ainda não se igualam ao que é observado na natureza. Diversas pesquisas tem o objetivo de melhorar a produtividade da PIVE através do aprimoramento das condições de maturação in vitro (MIV), fecundação in vitro (FIV) e cultivo in vitro (CIV) utilizados. Parte da dificuldade em otimizar as condições in vitro é devido a complexidade dos vários ambientes através dos quais gametas e embriões passam durante o seu desenvolvimento in vivo. Na natureza, a fecundação e o desenvolvimento embrionário inicial ocorrem dentro de uma estrutura chamada de oviduto, a qual proporciona um microambiente complexo e dinâmico, rico em nutrientes e compostos que atendem as necessidades dos gametas e do embrião durante suas diferentes etapas de desenvolvimento. Adicionalmente, a fecundação in vivo ocorre na presença de fluido folicular (FF), um fluido biológico derivado do plasma sanguíneo que estimula o processo de capacitação do oócito e dos espermatozoides. Há uma variedade de estudos que descrevem efeitos benéficos proporcionados pela presença de FF e células epiteliais do oviduto durante diferentes etapas da PIVE. Em vista disso, este trabalho irá explorar o uso de meios suplementados com FF e o co-cultivo com fragmentos de células do oviduto durante as etapas de FIV e CIV com o objetivo de avaliar os seus efeitos na produção in vitro de embriões. Um primeiro experimento será realizado para avaliar o efeito destes fatores somente na etapa de FIV, onde CCOs bovinos serão fecundados na presença e/ou ausência de FF e fragmentos de mucosa do oviduto (FMO). Um segundo experimento será realizado para observar o efeito do FF e FMO durante a etapa de CIV, onde zigotos bovinos serão cultivados em diferentes grupos experimentais na presença e/ou ausência de FF e FMO. A partir dos resultados nestes experimentos, será realizado um terceiro experimento no qual a suplementação de FF e co-cultivo fragmentos de células da mucosa do oviduto serão realizados em ambas as etapas de FIV e CIV, utilizando os grupos com os melhores resultados dos experimentos 1 e 2. Os embriões obtidos através destes experimentos serão avaliados quanto a taxa de clivagem, taxa de formação de blastocistos, cinética de desenvolvimento, morfologia, contagem do número de células e níveis de expressão relativa dos genes marcadores de qualidade embrionária: OCT4, HSP70, BAX, GLUT1, PGRM1 e HSD3B1. É esperado que a partir destes resultados seja possível montar protocolos de FIV e CIV que produza embriões de maior qualidade e de forma mais eficiente.