Banca de QUALIFICAÇÃO: ANELISE DE SARGES RAMOS

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: ANELISE DE SARGES RAMOS
DATA: 29/11/2024
HORA: 14:00
LOCAL: on line
TÍTULO:

AVALIAÇÃO DOS ESPERMATOZOIDES BOVINOS EXPOSTO A MEIO CONDICIONADO COM FRAGMENTOS DE MUCOSA DO OVIDUTO E COMPLEXO CUMULUS OÓCITOS MATURADOS IN VITRO

PALAVRAS-CHAVES:

Bos indicus, sêmen, capacitação espermática, reação acrossômica, ovidutos bovinos, CCOs.

PÁGINAS: 28
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Medicina Veterinária
SUBÁREA: Reprodução Animal
RESUMO:

Estudos sobre os eventos biológicos que regulam a interação dos fragmentos da mucosa do oviduto (FMO) e do complexo cumulus oócito (CCO) com as células espermáticas de bovinos visam a melhor aplicação de biotécnicas reprodutivas como melhora nas taxas de produção in vitro de embriões (PIVE). A adição de FMO e CCO na fertilização in vitro é um dos focos de análise, pois acredita-se na melhora da reação acrossômica, capacitação espermática e atividade mitocondrial as quais irão gerar mudanças bioquímicas na fluidez e no teor lipídico da membrana plasmática, ocasionando a hiperativação espermática, ocasionando um aumento da taxa de fecundação e consequentemente a de blastocistos. Apesar dos achados literários, muito pouco ainda se sabe sobre o papel que a células do FMO e CCO desempenham durante o processo de fertilização in vitro. O experimento tem como objetivo avaliar o efeito da incubação dos espermatozoides ao meio condicionado com estas células previamente maturados in vitro na capacitação espermática, morfologia, reação acrossômica e expressão de genes relacionados ao metabolismo de retinol, biossíntese de hormônios esteroides, esteroidogênese ovariana e interação citocina-receptor de citocina em diferentes touros da espécie bovina. Será realizado no Laboratório de Fertilização in vitro Prof. Otávio Mitio Ohashi da UFPA, campus Belém - PA, os materiais biológicos serão coletados em abatedouro local (SOCIPE) e servirão para as etapas de dois experimentos. O experimento I será divido em grupos com diferentes meios condicionados (com FMO e CCO) e expostos aos espermatozóides bovinos de três touros distintos. As doses de sêmen (quatro palhetas) de cada touro serão descongeladas, processados e então incubados por 24 horas em meio de fertilização in vitro (FIV) na concentração de 2x10⁶ espermatozoides por mL, de acordo com os quatro grupos experimentais a seguir: meio de FIV convencional (Controle - grupo 01); meio de FIV condicionado com CCO (grupo 02); meio de FIV condicionado com FMO (grupo 03); meio de FIV condicionado com FMO e CCO (grupo 04), serão realizadas três repetições por grupo (n=12) dos três touros (n=36). Após as 24 horas, serão feitas as análises nos espermatozóides dos quatros grupos em relação a cinética espermática (sistema Computer-Assisted Semen Analyses - CASA), capacitação espermática (fosforilação da tirosina), reação acrossômica (imunofluorescência com sonda FIT-PSA), potencial de membrana mitocondrial (imunofluorescência com JC-1) e fragmentação de DNA (laranja de acridina). O experimento irá realizar, em seguida, a expressão dos seguintes genes: DHRS3 (metabolismo do retinol), CYP1B1 (biossíntese de hormônios esteroides/esteroidogênese ovariana), PTGS2 (esteroidogênese ovariana), ATF3 (resposta ao estresse celular/ responsivo ao fator de transcrição de ativação de mamíferos/cAMP ), PMCA4 (expressão e secreção de Ca2⁺⁺ da membrana plasmática), PRM1 (envolvido no empacotamento de DNA), AKAP4 (regulação da motilidade do esperma), Beta-2-microglobulin (controle endógeno) e TATA binding protein (controle endógeno), serão avaliadas as estruturas dos quatro grupos em três réplicas (n=36). O experimento II contará com os quatros grupos oriundos do experimento I que passarão pelo processo de Produção in vitro de embriões (PIVE) e a produção de blastocisto será avaliada por análises quantitativas (taxa de clivagem, taxa de blastocisto e cinética embrionária) e qualitativas (contagem do número total de células- sonda Hoechst 33342), serão três repetições de PIVE por grupo (n=12) utilizando três touros diferentes (n=36) e desta forma determinar qual grupo apresentará o melhor resultado. A análise estatística será realizada por análise de variância (ANOVA), com o pós-teste adequado sugerido pelo software, adotando-se o nível de significância de p<0,05, através do programa SigmaPlot 14.0 (Systat Software, San Jose, CS, USA).

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - EDNALDO DA SILVA FILHO
Externo à Instituição - MARCELA DA SILVA CORDEIRO
Externo à Instituição - PRISCILA DI PAULA BESSA SANTANA