AVALIAÇÃO DO USO DA L-ARGININA E DA CICLODEXTRINA COMO AGENTES DA CAPACITAÇÃO ESPERMÁTICA NO PROCESSO DE PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BUBALINO
PALAVRAS CHAVES: Bubalusbubalis, capacitação espermática, ciclodextrinae l-arginina.
A elaboração de meios adequados e específicos para o processo de capacitação espermática, bem como, para o cultivo dos gametas e embriões pode alavancar a eficiência das biotécnicas da reprodução na espécie bubalina. A L-arginina (LA) e a metil β-ciclodextrina (MBCD) tem mostrado resultados promissores ao melhorar a motilidade e induzir a capacitação espermática em varias espécies, no entanto seus efeitos sobre o desenvolvimento do embrionário são poucos conhecidos. Assim, nossa hipótese é que o uso dessas substâncias como agentes indutores de capacitação como podem melhorar a taxa de fecundação e formação de embriões bubalinos. Para isso, foram avaliados o uso da LA e da MBCD(0,5mM, 0,75mM e 1,5 mM) e heparina como agentes no processo de capacitação espermática e na produção in vitro de embriões bubalinos, através das taxas de exocitose acrossomal, viabilidade espermática, potencial de membrana mitocondrial e fosforilação resíduos de tirosina nos diferentes períodos de incubação (0, 3 e 6 horas) de pré-capacitação. Foram utilizados os fluorocromos, como o isotiocianato de fluoresceína conjugado lectina Pisum sativum (PSA-FITC), o iodeto de 5,5', 6,6'-tetracloro-1,1',3,3'-tetraetilbenzimidazolilcarbocianina (JC-1) e o iodeto de propídio (PI) através da citometria de fluxo. Para analise do estado de fosforilação de resíduos de tirosina o anticorpo anti-fosfotirosina monoclonal conjugado com Alexa Fluor 488 em microscopia de epifluorescência. Além disso, foi determinado também o efeito dos agentes capacitantes na produção in vitro de embriões bubalinos. Nos períodos de 3 e 6 horas de incubação a taxa de lesão de membrana plasmática e acrossomal foi maior na concentração 1,5mM de MCBD quando comparado aos demais grupos (0,5mM, 0,75mM) heparina, L-arginina e controle (p<0.05). Quanto ao potencial de membrana mitocondrial as taxas foram semelhantes entre os grupos, porém houve diminuição do potencial a partir de 3 horas. Quanto a fosforilação dos resíduos de tirosina houve aumento gradativo a partir de 3 horas, mas não houve diferença entre grupos e entre os períodos de 3 e 6 horas (p>0.05). Já em relação, a produção in vitro de embriões bubalinos à taxas de clivagem e blastocistos foram semelhantes nos grupos heparina e CBDM. Porém, não foi observada formação de embriões nos grupos controle negativo e LA. O uso de MBCD na diferentes concentrações apresentaram resultados semelhantes ao controle positivo, demonstrando que MBCD pode ser utilizada como um substituto da heparina.