"ESTUDO IN VITRO DA INTER-RELÇÃO ENTRE A EXPRESSAO DE FATORES DE CRESCIMENTO E A EXPRESSAO DE MATALOPROTEINASE DA MATRIZ NO CARCINOMA ADENOIDE CISTICO"
Carcinoma adenoide cístico, Fator de crescimento epidérmico, Receptor do fator de crescimento epidérmico, Metaloproteinases da matriz, Matriz extracelular.
RESUMO
Introdução: O carcinoma adenoide cístico é um tumor maligno de glândula salivar e apresenta índices significativos de recorrência local, e, até mesmo, de metástase à distância. Nesse trabalho será estudado o papel desempenhado pelo EGF na morfologia, migração, invasão, resistência à apoptose e atividade das metaloproteinases da matriz (MMPs) na linhagem celular CAC2 derivada de carcinoma adenoide cístico. Avaliaremos também a relação entre a expressão de EGFR e MMPs in vitro, silenciando o gene EGFR.
Materiais e métodos: A expressão de EGF, EGFR, MMP-2 e -9 na linhagem celular CAC2 foi analisada por imunofluorescência indireta. O EGF foi testado na linhagem celular nas concentrações de 25, 50 e 100 ng/mL em análise morfológica, ensaio de “ferida” em monocamada, ensaios de migração e invasão em sistema de câmaras bipartites e zimografia. O silenciamento do gene EGFR foi realizado pela técnica de RNA de interferência e confirmado por Western Blot. O efeito do EGF sobre a apoptose celular será avaliado por meio de ensaios de apoptose em citometria de fluxo. E análise transcriptômica será realizada para avaliar a expressão das proteínas EGF, EGFR, MMP-2 e -9. Como controle será utilizada linhagem celular HSG derivada de glândula salivar humana.
Resultados parciais: A linhagem CAC2 expressa mais EGF, EGFR, MMP-2 e -9 que a linhagem HSG. As atividades de migração e invasão das células CAC2 foram estimuladas na presença de EGF nas concentrações de 25, 50 e 100 ng/mL. A atividade gelatinolítica de MMP-2 e -9 foi dose dependente à concentração de EGF. As células HSG não apresentaram atividades migratória, invasiva e gelatinolítica estimuladas por EGF. O EGF induziu alterações morfológicas na linhagem CAC2. O silenciamento do EGFR com RNA de interferência reduziu a expressão do próprio EGFR, mas também de MMP-2 e -9.
Estudos perspectivos: As células CAC2 e HSG serão submetidas aos ensaios de apoptose e à analise transcriptômica. E as células HSG serão submetidas à análise morfológica.