EFEITOS DA PRF NA EXPRESSÃO DE PROTEÍNAS E VIABILIDADE DE FIBROBLASTOS GENGIVAIS CULTIVADOS SOBRE DISCOS DE TITÂNIO TRATADOS COM NANOHIDROXIAPATITA.
Fibrina Rica em Plaquetas, Nanohidroxiapatita, Fibroblastos Gengivais.
A Fibrina Rica em Plaquetas (PRF) apresenta potencial ação nos processos de cicatrização de feridas devido a liberação de moléculas bioativas. A nanohidroxiapatita está associada à redução do processo inflamatório e possui boa biocompatibilidade em células que constituem os tecidos orais. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro a viabilidade celular e expressão de proteínas relacionadas com angiogênese, adesão e sobrevivência celular (VEGF, Paxilina, Vinculina, Fibronectina e p-AKT) em fibroblastos gengivais humanos cultivados sobre discos de titânio tratados ou não com nanohidroxiapatita e expostos ao meio condicionado com PRF. Para isso, foi estabelecida e imortalizada por transfecção com vetor h-TERT a linhagem de fibroblastos gengivais humanos. As membranas de PRF foram preparadas e incubadas por 48 horas em meio de cultivo sem SFB para a obtenção do meio condicionado. As análises foram realizadas nos tempos de 24 e 48 horas em células cultivadas sobre disco de titânio usinado ou tratado com nanohidroxiapatita em meio controle ou condicionado com PRF, resultando em 4 grupos experimentais (CT-TI, PRF-TI, CT-NANO, PRF-NANO). A viabilidade foi analisada por MTT e a expressão de proteínas foi verificada por imunofluorescência indireta. Não houve decréscimo na viabilidade de fibroblastos gengivais nos grupos experimentais. Células cultivadas sobre superfície tratada com nanohidroxiapatita e em meio condicionado com PRF apresentaram imunoexpressão significativamente maior de paxilina e p-AKT nos dois tempos experimentais (p<0.01). O mesmo ocorreu na expressão de vinculina no tempo de 24 horas (p<0.001). A expressão de fibronectina em 48 horas e VEGF em 24 e 48 horas foi significativamente maior quando as células foram expostas ao meio condicionado, independentemente da superfície dos discos (p<0.05). Sugere-se que fibroblastos gengivais cultivados em superfície tratada e em meio condicionado com PRF expressam maior quantidade de proteínas moduladoras da adesão, angiogênese e sobrevivência celular. Juntos, nossos resultados podem contribuir para a compreensão de alguns mecanismos relacionados ao reparo e cicatrização dos tecidos moles peri-implantares.