PERFIL DA EXPRESSÃO GÊNICA DIFERENCIAL DE MACRÓFAGOS THP-1 INFECTADOS POR Corynebacterium pseudotuberculosis
Infecção in vitro, Corynebacterium pseudotuberculosis, células THP-1, Dual RNA-seq.
A dinâmica de interação entre patógeno e hospedeiro no decorrer do processo infeccioso é responsável por uma complexa cascata de eventos celulares que envolvem a expressão de genes para a ativação de vias modulatórias em ambos os organismos. Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria Gram-positiva, intracelular facultativa e agente etiológico de patologias que afetam uma vasta gama de hospedeiros, dentre elas a linfadenite caseosa. Este patógeno é capaz de subverter a resposta imunológica do indivíduo infectado, se instala no interior de macrófagos e pode migrar para diferentes tecidos causando infecções sistêmicas. Devido ao avanço nas tecnologias de sequenciamento e bioinformática, é possível monitorar a expressão de genes do hospedeiro, o que pode fornecer percepções acerca dos eventos envolvidos na interação e traçar estratégias para novas terapias contra doenças infecciosas. Desta forma, este trabalho se propôs a avaliar o perfil de expressão gênica de macrófagos humanos derivados da linhagem monocítica THP-1 perante a infecção in vitro por C. pseudotuberculosis PA09. A cepa bacteriana foi obtida a partir de material caseoso, identificada por métodos moleculares e seu genoma foi sequenciado pela plataforma MiSeq. Os monócitos THP-1 foram cultivados e diferenciados por meio de PMA a 100 ng/mL, seguido da infecção em MOI 1:5. O sequenciamento do transcriptoma dos macrófagos ocorreu na plataforma NextSeq e a análise in silico para a identificação dos transcritos contra o genoma de referência GRCh38 envolveu um workflow dos programas Trimmomatic, HISAT2 e StringTie. Posteriormente, o edgeR foi adotado para a determinação da expressão diferencial e a plataforma g:Profiler compilou os dados funcionais destes genes. No total, 1213 genes foram hiper-regulados e 1679 foram hipo regulados, dos quais baseados na análise de enriquecimento, vários deles tem funções relacionadas a mecanismos do sistema imune. Dentre os genes induzidos destacam-se IDO1, CLEC4D, CLEC6A, CXCL13, CCL8, IL-6, IL-7 e IL-12, ao passo que IL-4 e catepsinas mostraram ser negativamente reguladas pelo patógeno.