Padronização de um Protocolo de PCR-RFLP para a detecção do Alelo HLA*B-58:01 em pacientes submetidos ao tratamento com Alopurinol
Gota, Alopurinol, HLA-B*58:01, Síndrome de Stevens-Johnson.
A imunogenética baseia-se no estudo de genes denominados imunorrelevantes, devido sua influência na homeostasia do organismo, onde genes de antígenos leucocitários humanos (HLA; do inglês Human Leucocytary Antigens) ocupam uma posição de destaque. Os genes HLA se Localizam no Complexo Principal de Histocompatibilidade (MHC). Durante anos foram descritas inúmeras associações entre antígenos HLA e reações adversas a alguns medicamentos, como é o caso do HLA-B*58:01 diretamente ligado a reações graves em pacientes que utilizam Alopurinol no tratamento de Artrite Gotosa (ou gota), que decorre de uma alteração no metabolismo das purinas, causando inflamações dolorosas nas articulações. O Alopurinol inibe a hipoxantina oxidase e reduz de forma eficaz os níveis séricos de urato, o que o coloca na base do tratamento da gota, porém, esporadicamente induz reações graves como a Síndrome de Stevens-Johnson (SSJ) e Necrose Epidérmica Tóxica (NET), onde a taxa de mortalidade para NET é bem elevada chegando a 50% dos casos e 5% para a SSJ. Indivíduos portadores do HLA-B*58:01 possuem um risco maior de desenvolver um dos quadros clínicos induzidos pelo Alopurinol, chegando a ser 97 vezes maior, do que em indivíduos que não possuem esse alelo. Estudos sugerem uma grande demanda para pesquisa de HLA-B*58:01 como biomarcador de hipersensibilidade ao Alopurinol. Todavia, as técnicas para a identificação de alelos HLA, não são prontamente disponíveis, possuem alto custo e geralmente têm um tempo de resposta muito longo, por isso apresenta-se a necessidade da utilização de um teste rápido, sensível e de baixo custo, para que se possa fazer a triagem antes do início da administração da droga. A farmacovigilância é definida como a ciência e atividades relativas a um conjunto de procedimentos relacionados à detecção, avaliação, compreensão e prevenção de reações adversas a fármacos, seu objetivo é promover a redução das taxas de morbidade e mortalidade, através da detecção precoce de problemas associados ao uso de medicamentos. Diante disso a técnica de PCR por polimorfismo do comprimento dos fragmentos de restrição (RFLP) torna-se uma alternativa atraente, na busca de um teste que atenda estes pré-requisitos, tendo como objetivo principal, padronizar um protocolo de PCR-RFLP para identificar o HLA*B-58:01, validar e implantar a tipagem do alelo e disponibilizá-la em serviços de referência em reumatologia.