PADRONIZAÇÃO DE REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) EM TEMPO REAL PARA DETECÇÃO DE CHLAMYDIA TRACHOMATIS EM AMOSTRAS ENDOCERVICAIS
Chlamydia trachomatis, RT-qPCR, diagnóstico molecular.
A Chlamydia trachomatis é bactéria sexualmente transmissível mais comum entre adolescentes sexualmente ativos e, quando não tratadas e mulheres, podem levar a sequelas tais como gravidez ectópica, infertilidade, dor pélvica crônica e doença inflamatória pélvica. A prevalência da doença entre adolescentes e adultos jovens sexualmente ativos com idade entre 14 e 24 anos é quase três vezes maior que a prevalência entre aqueles com idade entre 25 e 39 anos. No entanto, o diagnóstico laboratorial ainda é um obstáculo para a rápida identificação e tratamento dos indivíduos infectados. O presente estudo tem como principal objetivo a padronização de um ensaio de PCR em tempo real (RT-qPCR) para a detecção da C. trachomatis em amostras de endocérvice uterina. As amostras endocervicais serão coletadas de pacientes do sexo feminino que procurarem espontaneamente a realização do exame preventivo de colo de útero, em unidades básicas de saúde, em Belém, Pará, durante o período de janeiro de 2019 a fevereiro de 2021. Todos os procedimentos serão realizados visando a melhor relação custo-benefício, menor tempo de resultado e sempre que disponíveis, utilizando produtos de fornecedores nacionais para oferecer o menor custo de cada reação. A extração de DNA será realizada por kits previamente selecionados que oferecem DNA em quantidade e qualidade necessária para reação de RT-qPCR. Os primers e sondas para as reações serão desenhados e avaliados por softwares específicos e levarão em conta as sequências genômicas da C. trachomatis depositadas on-line. Os experimentos serão padronizados para a utilização das menores concentrações possíveis dos reagentes (primers, dNTPs, Taq polimerase, master mix, etc) e do menor tempo possível de ciclagem em cada reação..